人生就是博-尊龙凯时小鼠纤维肉瘤细胞MCA-205培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS

传代方法：第一次建议以1:2的比例进行传代

备注：培养液更换建议每两天进行。可用无菌离心管收集培养基以便进行对比培养。如果对比效果不理想，建议直接使用我们的完全培养基。

二、细胞处理及培养方法

在收到细胞后，待细胞状态良好后，确保完全培养液灌满并封闭瓶口是最佳处理方式。收到细胞后，首要用75%酒精喷洒消毒细胞瓶，再在超净台内进行无菌操作。随后，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，使细胞状态稳定后再进行后续处理。在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为售后依据，未提供照片将视为状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

1. 如果细胞汇合度未超过80%，将培养液收集至离心管，保留5ml完全培养基并放入37℃、5% CO2孵箱培养。

2. 如果细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：     1）弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。     2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观测细胞状态，待细胞大部分变圆并脱落后，添加5ml完全培养基终止消化。     3）轻轻吹打细胞并吸出，悬液转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。     4）按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次； 2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟； 3. 弃去上清，将沉淀细胞加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。 4. 将冻存细胞直接置于-80℃冰箱中，如后期需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻，至无结晶后用75%酒精擦拭冻存管外壁； 2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟； 3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放于37℃，5% CO2细胞培养箱中； 4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞因贴壁不稳，可能在运输中易发生脱落，这是正常现象。请将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养，沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，补加1-2ml完全培养基重悬，并按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞问题可重发的情况及标准： 1. 运输途中细胞损失、瓶身破损、培养液严重漏液等； 2. 收到产品48小时內报告的细胞污染问题； 3. 常温发货细胞静置24小时或干冰发货后24小时内未存活，需提供真实细胞状态照片； 4. 干冰发货细胞复苏后24小时或常温发货细胞静置4小时未开封后出现污染； 5. 细胞活性问题需在7天内报告并提供染色结果； 6. 收到细胞后必须在当天和接下来2-3天拍照，未告知视为合格。若4-7天内出现问题需提供相关照片和操作步骤以便核实，技术人员将判断责任并处理。

2）细胞问题不予重发的情况： 1. 客户造成的细胞污染； 2. 客户不当操作导致细胞状态不良； 3. 非推荐培养体系导致的细胞状态问题； 4. 无法提供培养前三天照片； 5. 进行其他处理导致细胞状态问题； 6. 收到2天内未告知； 7. 具体情况另行判定。

以上信息由人生就是博-尊龙凯时提供，确保在研究和开发过程中能够高效且规范地处理细胞培养相关事项。